CMP_monocle

Setup

Define notebook variables

working.genome <- "mm10"
umi.cutoff <- 200
data.path <- "/Users/heustonef/Desktop/10XGenomicsData/msAggr_scRNASeq/IndividualPops/"
cell.pop <- "CMP"
seurat.var.pct <- 90
n.neighbors <- 20

# Setting a seed to ensure reproducible data
seed.value <- 10

Notebook variable definitions

seurat.rds <- paste0(cell.pop, "Subpop_pctVar", seurat.var.pct, ".RDS")
projectName <- paste0(cell.pop, "Subpop_monocle" )
set.seed(seed.value)

Load libraries

Source functions

source("~/Desktop/10XGenomicsData/msAggr_scRNASeq/RFunctions/ColorPalette.R")

Store session info

sessionInfo.filename <- paste0(projectName, "_sessionInfo.txt")
sink(sessionInfo.filename)
sessionInfo()
sink()

Load datasets

Provide list of datasets

After messing with this a bit, I’ve decided the easiest thing to do is integrate the data from the seurat object. This object already has the metadata and gene_short_names that I will need, and based on monocle3 documentation may be the easiest way to make sure everything gets where it needs to be.

library(Seurat)

Registered S3 methods overwritten by 'htmltools':
  method               from         
  print.html           tools:rstudio
  print.shiny.tag      tools:rstudio
  print.shiny.tag.list tools:rstudio
Registered S3 method overwritten by 'data.table':
  method           from
  print.data.table     
Registered S3 method overwritten by 'htmlwidgets':
  method           from         
  print.htmlwidget tools:rstudio
Attaching SeuratObject

Attaching package: ‘Seurat’

The following object is masked from ‘package:SummarizedExperiment’:

    Assays

seurat.object <- readRDS(file.path(data.path, seurat.rds))
seurat.xprsn <- GetAssayData(seurat.object, slot = "counts", assay = "RNA")
cell_metadata <- seurat.object@meta.data[colnames(seurat.xprsn),]
gene_metadata <- data.frame(gene_short_name = rownames(seurat.xprsn))
rownames(gene_metadata) <- rownames(seurat.xprsn)
cds <- new_cell_data_set(expression_data = seurat.xprsn, 
                                                 cell_metadata = cell_metadata[colnames(seurat.xprsn), ], 
                                                 gene_metadata = gene_metadata)
rm(seurat.object, seurat.xprsn, cell_metadata, gene_metadata)

Look at object

cds

class: cell_data_set 
dim: 16278 12059 
metadata(1): cds_version
assays(1): counts
rownames(16278): Mrpl15 Lypla1 ... CAAA01147332.1 AC149090.1
rowData names(1): gene_short_name
colnames(12059): CMPm2_AAACATACAAGCCT-1 CMPm2_AAACATACACCCTC-1 ... CMPm2_TTTGCATGCTATTC-1
  CMPm2_TTTGCATGTGTCCC-1
colData names(11): orig.ident nCount_RNA ... RNA_snn_res.2.5 Size_Factor
reducedDimNames(0):
mainExpName: NULL
altExpNames(0):

Save CDS object

saveRDS(cds, file = paste0(projectName, ".RDS"))

Data analysis

Load saved object

cds <- readRDS(paste0(projectName, ".RDS"))

Preprocessing

cds <- preprocess_cds(cds = cds, metcdshod = "PCA", num_dim = 50, verbose = TRUE)

Remove noise by PCA ...

plot_pc_variance_explained(cds) + ggtitle("Proportion of variance explained (note not stdev)")

calculate proportion of variance explained

pct.list <- c(80, 85, 90, 95)
for (pct in pct.list){
    print(paste("Num pcs for", pct, "variance:", length(which(cumsum(cds@preprocess_aux$prop_var_expl*100) <= pct))))
}

[1] "Num pcs for 80 variance: 23"
[1] "Num pcs for 85 variance: 29"
[1] "Num pcs for 90 variance: 36"
[1] "Num pcs for 95 variance: 43"

Clustering analysis

Cluster with UMAP.

UMAP is based on uwot’s umap function

cds <- reduce_dimension(cds = cds, max_components = 2, reduction_method = "UMAP", preprocess_method = "PCA", umap.n_neighbors = n.neighbors)

plot umap. Can color cells based on any colData(cds) column (essentially metadata columns)

plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP", color_cells_by = "RNA_snn_res.1", show_trajectory_graph = FALSE, cell_size = .7, group_label_size = 5) + scale_color_manual(values = color.palette)

Cluster wiht tSNE

Note that this is stored in a different slot than UMAP and will not overwrite those data

cds <- reduce_dimension(cds = cds, max_components = 2, reduction_method = "tSNE", preprocess_method = "PCA")

Plot tSNE. Must specifiy slot to plot

plot_cells(cds = cds, reduction_method = "tSNE", color_cells_by = "RNA_snn_res.1", show_trajectory_graph = FALSE, cell_size = .7, group_label_size = 5) + scale_color_manual(values = color.palette)

Save CDS object

saveRDS(cds, file = paste0(projectName, ".RDS"))

Check for batch effects

Function align_cds tries to remove batch effects using mutual nearest neighbor alignment (package batchelor, Aaron Lun). Will test this on a different object.
Can specify alignment variable using parameter alignment_group. Note that only 1 variable can be specified

# cds.aligned <- align_cds(cds = cds, preprocess_method = "PCA", alignment_group = "nCount_RNA")

Failboat. Requires too much memory on laptop. ### Perform clustering analysis Monocle uses “community detection” (Leiden method and Louvain method).
Note that setting resolution = NULL and cluster_method = "leiden", then resoltuion is determined automatically (actually I think it’s just set to 0.0001, based on code)…

# read RDS
cds <- readRDS(file = paset0(projectName, ".RDS"))

res.list <- c(1e-4, 5e-4, 1e-3, 5e-3)
# reduction.method <- "UMAP"
# cluster.method <- "leiden"

for(res in res.list){
    # Cluster cells at given resolution
    cds <- cluster_cells(cds = cds, 
                                             reduction_method = "UMAP", 
                                             k = n.neighbors, 
                                             cluster_method = "leiden", 
                                             resolution = res, 
                                             num_iter = 10, 
                                             random_seed = seed.value,
                                             verbose = TRUE)
    # Copy cluster information to metadata in colData
    coldata.res <- paste0("umap_res_", res)
    colData(cds)[coldata.res] <- clusters(cds)
}

Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 12059 rows and 2 columns
  -k is set to 20
  Finding nearest neighbors...
    DONE. Run time: 0.0500000000001819s
  Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
    DONE. Run time: 0.00600000000031287s
  Build undirected graph from the weighted links ...
    DONE. Run time: 0.0739999999996144s
  Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type       CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed                 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 1e-04
leiden_find_partition: num_iter             10
leiden_find_partition: initial_membership   0
leiden_find_partition: edge_weights         0
leiden_find_partition: node_sizes           0
leiden_find_partition: number vertices      12059
leiden_find_partition: number edges         241180
    Current resolution is 1e-04; Modularity is 0.765915839716482; Quality is 476834.8874; Significance is 199715.956476619; Number of clusters is 6
    Done. Run time: 0.537866115570068s

  Clustering statistics

  Cell counts by cluster

  Maximal modularity is 0.765915839716482 for resolution parameter 1e-04

  Run kNN based graph clustering DONE.
  -Number of clusters: 6
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 12059 rows and 2 columns
  -k is set to 20
  Finding nearest neighbors...
    DONE. Run time: 0.056999999999789s
  Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
    DONE. Run time: 0.00700000000006185s
  Build undirected graph from the weighted links ...
    DONE. Run time: 0.0630000000001019s
  Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type       CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed                 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 5e-04
leiden_find_partition: num_iter             10
leiden_find_partition: initial_membership   0
leiden_find_partition: edge_weights         0
leiden_find_partition: node_sizes           0
leiden_find_partition: number vertices      12059
leiden_find_partition: number edges         241180
    Current resolution is 5e-04; Modularity is 0.89291159966731; Quality is 468670.909; Significance is 363006.081410037; Number of clusters is 12
    Done. Run time: 0.476253986358643s

  Clustering statistics

  Cell counts by cluster

  Maximal modularity is 0.89291159966731 for resolution parameter 5e-04

  Run kNN based graph clustering DONE.
  -Number of clusters: 12
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 12059 rows and 2 columns
  -k is set to 20
  Finding nearest neighbors...
    DONE. Run time: 0.0480000000002292s
  Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
    DONE. Run time: 0.00399999999990541s
  Build undirected graph from the weighted links ...
    DONE. Run time: 0.0610000000001492s
  Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type       CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed                 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.001
leiden_find_partition: num_iter             10
leiden_find_partition: initial_membership   0
leiden_find_partition: edge_weights         0
leiden_find_partition: node_sizes           0
leiden_find_partition: number vertices      12059
leiden_find_partition: number edges         241180
    Current resolution is 0.001; Modularity is 0.90927006471712; Quality is 462808.984; Significance is 413220.262079219; Number of clusters is 15
    Done. Run time: 0.472654104232788s

  Clustering statistics

  Cell counts by cluster

  Maximal modularity is 0.90927006471712 for resolution parameter 0.001

  Run kNN based graph clustering DONE.
  -Number of clusters: 15
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 12059 rows and 2 columns
  -k is set to 20
  Finding nearest neighbors...
    DONE. Run time: 0.0489999999999782s
  Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
    DONE. Run time: 0.00399999999990541s
  Build undirected graph from the weighted links ...
    DONE. Run time: 0.05600000000004s
  Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type       CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed                 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.005
leiden_find_partition: num_iter             10
leiden_find_partition: initial_membership   0
leiden_find_partition: edge_weights         0
leiden_find_partition: node_sizes           0
leiden_find_partition: number vertices      12059
leiden_find_partition: number edges         241180
    Current resolution is 0.005; Modularity is 0.928449098731827; Quality is 441389.33; Significance is 625299.349754509; Number of clusters is 41
    Done. Run time: 0.464754104614258s

  Clustering statistics

  Cell counts by cluster

  Maximal modularity is 0.928449098731827 for resolution parameter 0.005

  Run kNN based graph clustering DONE.
  -Number of clusters: 41

for(colID in colnames(colData(cds))){
    if(grepl("umap_res", colID)){
        cat("cluster count for", colID, ":", length(levels(unique(colData(cds)[,colID]))), "\n")
    }
}

cluster count for umap_res_0.001 : 15 
cluster count for umap_res_1e-04 : 6 
cluster count for umap_res_5e-04 : 12 
cluster count for umap_res_0.005 : 41 

save umap object

saveRDS(cds, file = paste0(projectName, "-UMAP.RDS"))

read object

cds <- readRDS(paste0(projectName, "-UMAP.RDS"))

for(colID in colnames(colData(cds))){
    if(grepl("umap_res", colID)){
        if(length(levels(colData(cds)[,colID])) <= length(color.palette)){
            cluster_plot <- plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP", 
                                                                 color_cells_by = colID, show_trajectory_graph = FALSE, 
                                                                 cell_size = 1, group_label_size = 5, label_groups_by_cluster = FALSE) + 
                scale_color_manual(values = color.palette) +
                ggtitle(paste0(projectName, "-", colID))
            plot(cluster_plot)
        } else {
            cluster_plot <- plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP", 
                                                                 color_cells_by = colID,  show_trajectory_graph = FALSE, 
                                                                 cell_size = 1, group_label_size = 5, label_groups_by_cluster = FALSE) + 
                ggtitle(paste0(projectName,  "-", colID))
            plot(cluster_plot)
            
        }
        # save plot
        png(filename = paste0(projectName,  "-", colID, ".png"), height= 800, width = 800)
        plot(cluster_plot)
        dev.off()
    }
}

Explore resolution

# library(igraph)
# library(schex)
# library(scater)
# library(scran)
# library(ggrepel)
# # plot_hexbin_meta_shiny(cds, col = "RNA_snn_res.1", action = "majority", min_nbins = 20, max_nbins = 50, dimension_reduction = "UMAP", na.rm = TRUE) 

For CMP, let’s start exploring with res = 0.001 # Find Marker Genes randomly guessing to set reference_cells value at 1000 (could also provide a list of cells if, e.g., wanted to specifiy an originating population)

marker_test_res <- top_markers(cds, group_cells_by = "umap_res_0.001", reference_cells = 1000, cores = 8)

  |                                                                                                         |   0%, ETA NA
  |                                                                                                      |   0%, ETA 01:05
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:41
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:33
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:20
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:16
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:12
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:12
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:09
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:07
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:07
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:06
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:05
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:05
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:05
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |                                                                                                      |   0%, ETA 00:04
  |=                                                                                                     |   0%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:03
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |=                                                                                                     |   1%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   1%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |==                                                                                                    |   2%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   2%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |===                                                                                                   |   3%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   3%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   3%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   4%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   4%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   5%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   5%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   6%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   6%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   6%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   6%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   7%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   7%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   7%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   7%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   8%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   8%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   8%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |   9%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |==========                                                                                            |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:02
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  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:01
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:01
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  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:01
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:01
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:02
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:02
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:02
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  |=============================================                                                         |  44%, ETA 00:01
  |=============================================                                                         |  44%, ETA 00:01
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  |====                                                                                                  |   4%, ETA 00:17
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:21
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:20
  |=====                                                                                                 |   5%, ETA 00:19
  |======                                                                                                |   6%, ETA 00:15
  |=======                                                                                               |   6%, ETA 00:15
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:17
  |=======                                                                                               |   7%, ETA 00:16
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  |========                                                                                              |   8%, ETA 00:14
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  |=========                                                                                             |   9%, ETA 00:13
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  |===========                                                                                           |  10%, ETA 00:13
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:12
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:13
  |===========                                                                                           |  11%, ETA 00:13
  |============                                                                                          |  11%, ETA 00:13
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:12
  |============                                                                                          |  12%, ETA 00:12
  |=============                                                                                         |  12%, ETA 00:12
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:12
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:12
  |=============                                                                                         |  13%, ETA 00:12
  |==============                                                                                        |  13%, ETA 00:12
  |==============                                                                                        |  14%, ETA 00:12
  |==============                                                                                        |  14%, ETA 00:12
  |==============                                                                                        |  14%, ETA 00:12
  |===============                                                                                       |  14%, ETA 00:11
  |===============                                                                                       |  15%, ETA 00:11
  |===============                                                                                       |  15%, ETA 00:11
  |================                                                                                      |  15%, ETA 00:12
  |================                                                                                      |  15%, ETA 00:11
  |================                                                                                      |  16%, ETA 00:11
  |================                                                                                      |  16%, ETA 00:11
  |=================                                                                                     |  16%, ETA 00:11
  |=================                                                                                     |  17%, ETA 00:11
  |=================                                                                                     |  17%, ETA 00:11
  |=================                                                                                     |  17%, ETA 00:11
  |==================                                                                                    |  17%, ETA 00:11
  |==================                                                                                    |  18%, ETA 00:11
  |==================                                                                                    |  18%, ETA 00:11
  |==================                                                                                    |  18%, ETA 00:10
  |===================                                                                                   |  18%, ETA 00:11
  |===================                                                                                   |  19%, ETA 00:10
  |===================                                                                                   |  19%, ETA 00:10
  |====================                                                                                  |  19%, ETA 00:10
  |====================                                                                                  |  19%, ETA 00:10
  |====================                                                                                  |  20%, ETA 00:10
  |====================                                                                                  |  20%, ETA 00:10
  |=====================                                                                                 |  20%, ETA 00:10
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:10
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:10
  |=====================                                                                                 |  21%, ETA 00:10
  |======================                                                                                |  21%, ETA 00:10
  |======================                                                                                |  22%, ETA 00:10
  |======================                                                                                |  22%, ETA 00:10
  |=======================                                                                               |  22%, ETA 00:10
  |=======================                                                                               |  22%, ETA 00:09
  |=======================                                                                               |  23%, ETA 00:10
  |=======================                                                                               |  23%, ETA 00:10
  |========================                                                                              |  23%, ETA 00:10
  |========================                                                                              |  23%, ETA 00:09
  |========================                                                                              |  24%, ETA 00:10
  |========================                                                                              |  24%, ETA 00:09
  |=========================                                                                             |  24%, ETA 00:09
  |=========================                                                                             |  25%, ETA 00:09
  |=========================                                                                             |  25%, ETA 00:09
  |==========================                                                                            |  25%, ETA 00:09
  |==========================                                                                            |  25%, ETA 00:09
  |==========================                                                                            |  26%, ETA 00:09
  |==========================                                                                            |  26%, ETA 00:09
  |===========================                                                                           |  26%, ETA 00:09
  |===========================                                                                           |  26%, ETA 00:09
  |===========================                                                                           |  27%, ETA 00:09
  |===========================                                                                           |  27%, ETA 00:09
  |============================                                                                          |  27%, ETA 00:09
  |============================                                                                          |  27%, ETA 00:09
  |============================                                                                          |  28%, ETA 00:09
  |=============================                                                                         |  28%, ETA 00:09
  |=============================                                                                         |  28%, ETA 00:09
  |=============================                                                                         |  29%, ETA 00:09
  |=============================                                                                         |  29%, ETA 00:09
  |==============================                                                                        |  29%, ETA 00:09
  |==============================                                                                        |  29%, ETA 00:09
  |==============================                                                                        |  30%, ETA 00:09
  |==============================                                                                        |  30%, ETA 00:08
  |===============================                                                                       |  30%, ETA 00:08
  |===============================                                                                       |  30%, ETA 00:08
  |===============================                                                                       |  31%, ETA 00:08
  |================================                                                                      |  31%, ETA 00:08
  |================================                                                                      |  31%, ETA 00:08
  |================================                                                                      |  31%, ETA 00:08
  |================================                                                                      |  32%, ETA 00:08
  |=================================                                                                     |  32%, ETA 00:08
  |=================================                                                                     |  32%, ETA 00:08
  |=================================                                                                     |  33%, ETA 00:08
  |=================================                                                                     |  33%, ETA 00:08
  |==================================                                                                    |  33%, ETA 00:08
  |==================================                                                                    |  33%, ETA 00:08
  |==================================                                                                    |  34%, ETA 00:08
  |===================================                                                                   |  34%, ETA 00:08
  |===================================                                                                   |  34%, ETA 00:08
  |===================================                                                                   |  34%, ETA 00:08
  |===================================                                                                   |  35%, ETA 00:08
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  |====================================                                                                  |  36%, ETA 00:08
  |=====================================                                                                 |  36%, ETA 00:08
  |=====================================                                                                 |  37%, ETA 00:08
  |======================================                                                                |  37%, ETA 00:07
  |======================================                                                                |  37%, ETA 00:07
  |======================================                                                                |  37%, ETA 00:07
  |======================================                                                                |  38%, ETA 00:07
  |=======================================                                                               |  38%, ETA 00:07
  |=======================================                                                               |  38%, ETA 00:07
  |=======================================                                                               |  39%, ETA 00:07
  |========================================                                                              |  39%, ETA 00:07
  |========================================                                                              |  39%, ETA 00:07
  |========================================                                                              |  39%, ETA 00:07
  |=========================================                                                             |  40%, ETA 00:07
  |=========================================                                                             |  40%, ETA 00:07
  |=========================================                                                             |  40%, ETA 00:07
  |=========================================                                                             |  41%, ETA 00:07
  |==========================================                                                            |  41%, ETA 00:07
  |==========================================                                                            |  41%, ETA 00:07
  |==========================================                                                            |  41%, ETA 00:07
  |==========================================                                                            |  42%, ETA 00:07
  |===========================================                                                           |  42%, ETA 00:07
  |===========================================                                                           |  42%, ETA 00:07
  |===========================================                                                           |  42%, ETA 00:07
  |============================================                                                          |  43%, ETA 00:07
  |============================================                                                          |  43%, ETA 00:07
  |============================================                                                          |  43%, ETA 00:07
  |============================================                                                          |  43%, ETA 00:07
  |=============================================                                                         |  44%, ETA 00:07
  |=============================================                                                         |  44%, ETA 00:07
  |=============================================                                                         |  44%, ETA 00:07
  |=============================================                                                         |  45%, ETA 00:07
  |==============================================                                                        |  45%, ETA 00:06
  |==============================================                                                        |  45%, ETA 00:06
  |==============================================                                                        |  45%, ETA 00:06
  |===============================================                                                       |  46%, ETA 00:06
  |===============================================                                                       |  46%, ETA 00:06
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  |===============================================                                                       |  46%, ETA 00:06
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  |================================================                                                      |  47%, ETA 00:06
  |=================================================                                                     |  48%, ETA 00:06
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  |=================================================                                                     |  48%, ETA 00:06
  |==================================================                                                    |  49%, ETA 00:06
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  |===========================================================                                           |  58%, ETA 00:05
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  |============================================================                                          |  59%, ETA 00:05
  |============================================================                                          |  59%, ETA 00:05
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  |===============================================================                                       |  62%, ETA 00:04
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  |================================================================                                      |  62%, ETA 00:04
  |================================================================                                      |  63%, ETA 00:04
  |================================================================                                      |  63%, ETA 00:04
  |================================================================                                      |  63%, ETA 00:04
  |=================================================================                                     |  63%, ETA 00:04
  |=================================================================                                     |  64%, ETA 00:04
  |=================================================================                                     |  64%, ETA 00:04
  |==================================================================                                    |  64%, ETA 00:04
  |==================================================================                                    |  65%, ETA 00:04
  |==================================================================                                    |  65%, ETA 00:04
  |==================================================================                                    |  65%, ETA 00:04
  |===================================================================                                   |  65%, ETA 00:04
  |===================================================================                                   |  66%, ETA 00:04
  |===================================================================                                   |  66%, ETA 00:04
  |===================================================================                                   |  66%, ETA 00:04
  |====================================================================                                  |  66%, ETA 00:04
  |====================================================================                                  |  67%, ETA 00:04
  |====================================================================                                  |  67%, ETA 00:04
  |=====================================================================                                 |  67%, ETA 00:04
  |=====================================================================                                 |  67%, ETA 00:04
  |=====================================================================                                 |  68%, ETA 00:04
  |=====================================================================                                 |  68%, ETA 00:04
  |======================================================================                                |  68%, ETA 00:04
  |======================================================================                                |  69%, ETA 00:04
  |======================================================================                                |  69%, ETA 00:04
  |======================================================================                                |  69%, ETA 00:03
  |=======================================================================                               |  69%, ETA 00:03
  |=======================================================================                               |  70%, ETA 00:03
  |=======================================================================                               |  70%, ETA 00:03
  |========================================================================                              |  70%, ETA 00:03
  |========================================================================                              |  70%, ETA 00:03
  |========================================================================                              |  71%, ETA 00:03
  |========================================================================                              |  71%, ETA 00:03
  |=========================================================================                             |  71%, ETA 00:03
  |=========================================================================                             |  71%, ETA 00:03
  |=========================================================================                             |  72%, ETA 00:03
  |=========================================================================                             |  72%, ETA 00:03
  |==========================================================================                            |  72%, ETA 00:03
  |==========================================================================                            |  73%, ETA 00:03
  |==========================================================================                            |  73%, ETA 00:03
  |===========================================================================                           |  73%, ETA 00:03
  |===========================================================================                           |  73%, ETA 00:03
  |===========================================================================                           |  74%, ETA 00:03
  |===========================================================================                           |  74%, ETA 00:03
  |============================================================================                          |  74%, ETA 00:03
  |============================================================================                          |  74%, ETA 00:03
  |============================================================================                          |  75%, ETA 00:03
  |============================================================================                          |  75%, ETA 00:03
  |=============================================================================                         |  75%, ETA 00:03
  |=============================================================================                         |  75%, ETA 00:03
  |=============================================================================                         |  76%, ETA 00:03
  |==============================================================================                        |  76%, ETA 00:03
  |==============================================================================                        |  76%, ETA 00:03
  |==============================================================================                        |  77%, ETA 00:03
  |==============================================================================                        |  77%, ETA 00:03
  |===============================================================================                       |  77%, ETA 00:03
  |===============================================================================                       |  77%, ETA 00:03
  |===============================================================================                       |  78%, ETA 00:03
  |===============================================================================                       |  78%, ETA 00:02
  |================================================================================                      |  78%, ETA 00:02
  |================================================================================                      |  78%, ETA 00:02
  |================================================================================                      |  79%, ETA 00:02
  |=================================================================================                     |  79%, ETA 00:02
  |=================================================================================                     |  79%, ETA 00:02
  |=================================================================================                     |  79%, ETA 00:02
  |=================================================================================                     |  80%, ETA 00:02
  |==================================================================================                    |  80%, ETA 00:02
  |==================================================================================                    |  80%, ETA 00:02
  |==================================================================================                    |  81%, ETA 00:02
  |==================================================================================                    |  81%, ETA 00:02
  |===================================================================================                   |  81%, ETA 00:02
  |===================================================================================                   |  81%, ETA 00:02
  |===================================================================================                   |  82%, ETA 00:02
  |====================================================================================                  |  82%, ETA 00:02
  |====================================================================================                  |  82%, ETA 00:02
  |====================================================================================                  |  82%, ETA 00:02
  |====================================================================================                  |  83%, ETA 00:02
  |=====================================================================================                 |  83%, ETA 00:02
  |=====================================================================================                 |  83%, ETA 00:02
  |=====================================================================================                 |  83%, ETA 00:02
  |=====================================================================================                 |  84%, ETA 00:02
  |======================================================================================                |  84%, ETA 00:02
  |======================================================================================                |  84%, ETA 00:02
  |======================================================================================                |  85%, ETA 00:02
  |======================================================================================                |  85%, ETA 00:02
  |=======================================================================================               |  85%, ETA 00:02
  |=======================================================================================               |  85%, ETA 00:02
  |=======================================================================================               |  86%, ETA 00:02
  |========================================================================================              |  86%, ETA 00:02
  |========================================================================================              |  86%, ETA 00:02
  |========================================================================================              |  86%, ETA 00:02
  |========================================================================================              |  87%, ETA 00:01
  |=========================================================================================             |  87%, ETA 00:01
  |=========================================================================================             |  87%, ETA 00:01
  |=========================================================================================             |  87%, ETA 00:01
  |=========================================================================================             |  88%, ETA 00:01
  |==========================================================================================            |  88%, ETA 00:01
  |==========================================================================================            |  88%, ETA 00:01
  |==========================================================================================            |  89%, ETA 00:01
  |===========================================================================================           |  89%, ETA 00:01
  |===========================================================================================           |  89%, ETA 00:01
  |===========================================================================================           |  89%, ETA 00:01
  |===========================================================================================           |  90%, ETA 00:01
  |============================================================================================          |  90%, ETA 00:01
  |============================================================================================          |  90%, ETA 00:01
  |============================================================================================          |  90%, ETA 00:01
  |============================================================================================          |  91%, ETA 00:01
  |=============================================================================================         |  91%, ETA 00:01
  |=============================================================================================         |  91%, ETA 00:01
  |=============================================================================================         |  91%, ETA 00:01
  |==============================================================================================        |  92%, ETA 00:01
  |==============================================================================================        |  92%, ETA 00:01
  |==============================================================================================        |  92%, ETA 00:01
  |==============================================================================================        |  93%, ETA 00:01
  |===============================================================================================       |  93%, ETA 00:01
  |===============================================================================================       |  93%, ETA 00:01
  |===============================================================================================       |  93%, ETA 00:01
  |===============================================================================================       |  94%, ETA 00:01
  |================================================================================================      |  94%, ETA 00:01
  |================================================================================================      |  94%, ETA 00:01
  |================================================================================================      |  94%, ETA 00:01
  |=================================================================================================     |  95%, ETA 00:01
  |=================================================================================================     |  95%, ETA 00:01
  |=================================================================================================     |  95%, ETA 00:01
  |=================================================================================================     |  95%, ETA 00:01
  |==================================================================================================    |  96%, ETA 00:00
  |==================================================================================================    |  96%, ETA 00:00
  |==================================================================================================    |  96%, ETA 00:00
  |==================================================================================================    |  97%, ETA 00:00
  |===================================================================================================   |  97%, ETA 00:00
  |===================================================================================================   |  97%, ETA 00:00
  |===================================================================================================   |  97%, ETA 00:00
  |====================================================================================================  |  98%, ETA 00:00
  |====================================================================================================  |  98%, ETA 00:00
  |====================================================================================================  |  98%, ETA 00:00
  |====================================================================================================  |  98%, ETA 00:00
  |===================================================================================================== |  99%, ETA 00:00
  |===================================================================================================== |  99%, ETA 00:00
  |===================================================================================================== |  99%, ETA 00:00
  |===================================================================================================== |  99%, ETA 00:00
  |======================================================================================================| 100%, ETA 00:00
  |==================================================================================================| 100%, Elapsed 00:11

rowData(cds)$gene_short_name <- row.names(rowData(cds))
marker_test_res

KEY: a data.frame where the rows are genes and the columns are
* gene_id vector of gene names * gene_short_name vector of gene short names * cell_group character vector of the cell group to which the cell belongs * marker_score numeric vector of marker scores as the fraction expressing scaled by the specificity. The value ranges from 0 to 1. * mean_expression numeric vector of mean normalized expression of the gene in the cell group * fraction_expressing numeric vector of fraction of cells expressing the gene within the cell group * specificity numeric vector of a measure of how specific the gene’s expression is to the cell group based on the Jensen-Shannon divergence. The value ranges from 0 to 1. * pseudo_R2 numeric vector of pseudo R-squared values, a measure of how well the gene expression model fits the categorical data relative to the null model. The value ranges from 0 to 1. * marker_test_p_value numeric vector of likelihood ratio p-values * marker_test_q_value numeric vector of likelihood ratio q-values

top_pseudoR2_markers <- marker_test_res %>%
    filter(fraction_expressing >= 0.10) %>%
    group_by(cell_group) %>%
    top_n(3, pseudo_R2)
top_pseudoR2_markers <- unique(top_pseudoR2_markers %>% pull(gene_id))
my_plot <- plot_genes_by_group(cds, top_pseudoR2_markers, group_cells_by = "umap_res_0.001", ordering_type = "maximal_on_diag", max.size = 10)

Warning in if (axis_order == "marker_group") { :
  the condition has length > 1 and only the first element will be used

plot(my_plot)
png(filename = paste0(projectName, "-map_res_0.001", "-pseudoR2markers.png"), height = 1200, width = 800)

plot(my_plot)
dev.off()

quartz_off_screen 
                2 

Auto Annotate with Garnett

Start with marker_test_res

# Require that markers have at least JS specificty score > 0.5 and
# be significant in the logistic test for identifying their cell type:
garnett_markers <- marker_test_res %>%
                        filter(marker_test_q_value < 0.01 & specificity >= 0.5) %>%
                        group_by(cell_group) %>%
                        top_n(5, marker_score)
# Exclude genes that are good markers for more than one cell type:
garnett_markers <- garnett_markers %>% 
                        group_by(gene_short_name) %>%
                        filter(n() == 1)
# Generate garnett marker file
generate_garnett_marker_file(garnett_markers, file = paste0(projectName, "-garnettMarkers.txt"))

Garnett marker file written to CMPSubpop_monocle-garnettMarkers.txt

__Note that this file can be manually modified to add/remove classifier markers Abandoning this! 1) I’m getting distracted and 2) Will have to play with resolution to get marker genes for more than 3 clusters

Trajectory Inference

First make sure correct resolution is represented in cluster slot

cds <- cluster_cells(cds = cds, 
                                         reduction_method = "UMAP", 
                                         k = n.neighbors, 
                                         cluster_method = "leiden", 
                                         resolution = 0.001, 
                                         num_iter = 10, 
                                         random_seed = seed.value,
                                         verbose = TRUE)

Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 12059 rows and 2 columns
  -k is set to 20
  Finding nearest neighbors...
    DONE. Run time: 0.0860000000002401s
  Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
    DONE. Run time: 0.00700000000006185s
  Build undirected graph from the weighted links ...
    DONE. Run time: 0.114000000000033s
  Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type       CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed                 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.001
leiden_find_partition: num_iter             10
leiden_find_partition: initial_membership   0
leiden_find_partition: edge_weights         0
leiden_find_partition: node_sizes           0
leiden_find_partition: number vertices      12059
leiden_find_partition: number edges         241180
    Current resolution is 0.001; Modularity is 0.90927006471712; Quality is 462808.984; Significance is 413220.262079219; Number of clusters is 15
    Done. Run time: 0.482103109359741s

  Clustering statistics

  Cell counts by cluster

  Maximal modularity is 0.90927006471712 for resolution parameter 0.001

  Run kNN based graph clustering DONE.
  -Number of clusters: 15

Fit principal graph. Set use_partition = TRUE to not require all cells be connected on a single graph

cds <- learn_graph(cds, use_partition = TRUE, verbose = TRUE)

Processing partition component 1
Current partition is 1
Using 853 nodes for principal graph
Finding kNN using RANN with 25 neighbors
Calculating the local density for each sample based on kNNs ...
iter = 1 obj = 130.223386401442
iter = 2 obj = 109.625949981088
iter = 3 obj = 106.2922795642
iter = 4 obj = 105.132713094611
iter = 5 obj = 104.528117043417
iter = 6 obj = 103.965088734642
iter = 7 obj = 103.664900375243
iter = 8 obj = 103.397710415399
iter = 9 obj = 103.237145490188
iter = 10 obj = 103.111244051499
eps = 0.00121953622497916 reach maxiter.
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 11545 rows and 2 columns
  -k is set to 25
  Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0579999999999927s
 Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time:0.00500000000010914s
 Build undirected graph from the weighted links ...
DONE ~0.06899999999996s
 Run louvain clustering on the graph ...

Running louvain iteration  1 ...

Maximal modularity is 0.917550960826082; corresponding resolution is No resolution

Run kNN based graph clustering DONE, totally takes 0.37037205696106 s.

  -Number of clusters: 31 

  |                                                                                                                                        
  |                                                                                                                                  |   0%
  |                                                                                                                                        
  |==================================================================================================================================| 100%

Running graph pruning ...
Processing partition component 2
Current partition is 2
Using 41 nodes for principal graph
Finding kNN using RANN with 25 neighbors
Calculating the local density for each sample based on kNNs ...
iter = 1 obj = 0.381509156802649
iter = 2 obj = -0.122641652694875
iter = 3 obj = -0.220671093279736
iter = 4 obj = -0.251939077317561
iter = 5 obj = -0.26629095473749
iter = 6 obj = -0.276282567564283
iter = 7 obj = -0.281598233966818
iter = 8 obj = -0.285065852930487
iter = 9 obj = -0.287594604615971
iter = 10 obj = -0.289553992025698
eps = 0.00681301866682352 reach maxiter.
Run kNN based graph clustering starts:
  -Input data of 514 rows and 2 columns
  -k is set to 25
  Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.00300000000015643s
 Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time:0s
 Build undirected graph from the weighted links ...
DONE ~0.00299999999970169s
 Run louvain clustering on the graph ...

Running louvain iteration  1 ...

Maximal modularity is 0.744597171796696; corresponding resolution is No resolution

Run kNN based graph clustering DONE, totally takes 0.0229921340942383 s.

  -Number of clusters: 8 

  |                                                                                                                                        
  |                                                                                                                                  |   0%
  |                                                                                                                                        
  |==================================================================================================================================| 100%

Running graph pruning ...

Projecting cells to principal points for partition: 1

Projecting cells to principal points for partition: 2

save result

my_plot <- plot_cells(cds, reduction_method = "UMAP", 
                                            color_cells_by = "cluster", 
                                            label_groups_by_cluster = FALSE, label_leaves = FALSE, label_branch_points = TRUE,  
                                            cell_size = 1, group_label_size = 8, graph_label_size = 5) + 
                    scale_color_manual(values = color.palette) +
                    ggtitle(paste0(projectName, "-umap_res0.001_psdtime"))
plot(my_plot)

png(filename = paste0(projectName, "-umap_res0.001_psdtime.png"), height = 800, width = 800)

plot(my_plot)
dev.off()

quartz_off_screen 
                2 

Will need to complete msAggr to order cells. For example, will pick those CMP cells that cluster with LSK and “earliest” CMPs.

Plot by gene expression

my_plot <- plot_cells(cds, reduction_method = "UMAP", 
            genes = c("Elane", "Fli1", "Gata1", "Gata2", "Klf1", "Meis1", "Zfpm1", "Dntt", "Cd150"), trajectory_graph_color = "red",
            label_groups_by_cluster = FALSE, label_leaves = FALSE, label_branch_points = TRUE,  
            cell_size = 1, group_label_size = 8, graph_label_size = 5, trajectory_graph_segment_size = 1)

Warning: `guides(<scale> = FALSE)` is deprecated. Please use `guides(<scale> = "none")` instead.

plot(my_plot)

Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps
Warning: ggrepel: 1 unlabeled data points (too many overlaps). Consider increasing max.overlaps

png(filename = paste0(projectName, "-umap_YFG_psdtime.png"), height = 1600, width = 2000, bg = "transparent")

plot(my_plot)
dev.off()

quartz_off_screen 
                2